日照这家医院查出2例IgM阳性?原来是虚惊一场!

2020-10-15 20:19

“听说你们医院查出2例新型冠状病毒抗体IgM阳性?”这是日照心脏病医院/青岛大学附属日照医院今天接到最多的电话!事实真的是这样吗?

2020年10月14日下午,日照心脏病医院/青岛大学附属日照医院检验中心在对核酸检测受检者进行新型冠状病毒核酸检测时检测到两份血清样本新型冠状病毒抗体IgM阳性。

在这个新冠肺炎疫情反复的重要时期,任何关于疫情防控的信息都牵动着每一位市民朋友的心!

面对疫情,日照心脏病医院/青岛大学附属日照医院没有丝毫懈怠,严格操作规范,检验中心立即进行复检、核对,并同时查看仪器状态,试剂状态。确认在控、复检结果核对后,立即上报。

医院高度重视,紧急启动疫情防控应急预案工作,院感办在第一时间将相关信息及时上报至高新区管委与市疾控中心,市疾控中心迅速反应,通知五莲县疾控中心与东港区疾控中心安排两位受检者及时进行复检。

经当地疾控中心复查,两位受检者肺部CT无影像学改变,血清IgM、IgG、核酸检测均呈阴性,判断两位受检者均为“假阳性”。

为什么会出现“假阳性”?

特异IgM和IgG免疫测定假阳性通常有以下两个方面的原因,一是试剂盒阳性判断值(Cut-off value)的设定,一些处于阳性判断值附近的弱阳性结果,很可能是假阳性;其二是患者标本中存在导致免疫测定假阳性的内源性或外源性干扰物质。

(一)阳性判断值的设定

胶体金试纸条检测是通过肉眼观察颜色有否来判断阳性和阴性,不存在阳性判断值的问题,但会存在不同检测者判断的差异。化学发光免疫试验(CLIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)则需要设定阳性判断值,其较好的做法是通过测定大量的阴性人群(可数千份)和一定数量(可数百份)的已知阳性人群标本,会得到如图2的一个分布,采用接受机工作特性(Receiver Operating characteristic,ROC)曲线或其他统计学方法得到的阳性判断值,通常为假阳性和假阴性均较低且达到平衡状态时的测定信号如OD值或发光值。因此,不可避免处于其周边阳性一侧的结果,会有一部分弱阳性其实际为假阳性。

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(二)干扰物质

1、内源性:内源性干扰物质一般包括类风湿因子、嗜异性抗体、补体、因使用鼠抗体治疗或诊断诱导的抗鼠Ig 抗体等。在日常的临床血清(浆)标本中,有相当比例的标本不同程度的含有上述各种干扰物质,从而可能导致测定结果的假阳性。

(1)类风湿因子

(Rheumatoid factors,RF)

在类风湿患者、其他疾病以及正常人血清中,常含有较高或不同浓度的RF,其通常为IgM型,亦有IgG和IgA型,RF具有与变性IgG产生非特异结合的特点,因此在免疫测定中,其可与固相上包被的特异抗体IgG以及随后加入的标记的特异抗体IgG结合,从而出现假阳性结果。尤其是在捕获法IgM型特异抗体的测定中表现最为明显,因为此时固相包被的抗体为抗人μ链抗体,IgM型RF的存在可使其大量结合于固相。

为避免RF的干扰,通常可采取以下措施:1)稀释标本。这在判断急性病原体感染的特异IgM抗体检测等尤为有用。因为急性感染时,血循环中特异的IgM抗体滴度通常很高,而RF滴度通常相对要低很多。因此,在测定前对标本进行稀释,特异的IgM因高滴度仍可检出,而非特异的RF则会因为稀释变成很低的滴度,从而不影响测定。2)改变酶标抗体。由于RF结合的是IgG的Fc片段,如果将标记抗体的Fc片段酶切去除,仅留下具有特异结合功能的F(ab’)2部分用于标记,则在测定中即可避免RF的干扰。3)标本中RF用变性IgG预先封闭。将经热变性(63℃,10 min)的动物如兔、羊等的IgG加入到标本稀释液中。此外,在测定特异IgM时,也可使用抗人IgG去除临床标本中RF和IgG。4)测定时,可在标本中加入一定浓度的尿素,其可以解离低亲合力结合的RF和IgG,因而可以去除RF的干扰。

(2)嗜异性抗体

(Heterophilicantibodies)

人类血清中可能会含有抗啮齿类动物(如鼠、马、羊等)的抗体,即天然嗜异性抗体。有研究表明,天然的嗜异性抗体(IgG)可分为两类,一类(85%的假阳性由其引起)可结合于山羊、小鼠、大鼠、马和牛IgG的Fab区域,但不与兔IgG的Fab区结合。另一类(15%的假阳性由其引起)可结合于小鼠、马、牛和兔IgG的FC区表位,但不与山羊和大鼠IgG的FC区表位结合。嗜异性抗体可通过交联固相和标记的单抗或多抗而出现假阳性反应。

由嗜异性抗体引起的干扰可通过下述方法避免:

1)使用特异的兔F(ab’)2片段作为固相或测定标记抗体。

2)在标本或标本稀释液中加入过量的动物Ig,封闭可能存在的嗜异性抗体。但加入量不足或亚类不同时无效。

3)补体

在固相免疫测定中,来自哺乳动物的固相特异抗体和标记二抗均可以激活人补体系统。因为其在固相吸附及结合过程中,抗体分子发生变构, Fc段的补体C1q结合位点被暴露出来,这样C1q就成为一个中介物将二者交联起来,从而出现假阳性结果。由补体引起的干扰可采用56℃30 min加热可使标本中的补体C1q灭活。但实施前,一定要有实验证明这种灭活不会影响特定试剂的检测结果。

4)因使用鼠抗体治疗或诊断诱导的抗鼠Ig抗体

在临床上,有可能使用鼠源性单克隆抗体进行靶向治疗,及使用放射性核素标记鼠源性单克隆抗体进行影像诊断等,均有可能使相应患者体内产生抗鼠抗体。这种抗鼠抗体对使用鼠源性单克隆抗体的免疫测定,可产生假阳性结果。

由抗鼠抗体引起的干扰可通过下述方法避免:

1)使用特异的抗体F(ab’)2片段作为固相或测定酶标抗体。

2)在标本或标本稀释液中加入过量的鼠Ig,封闭可能存在的抗鼠抗体。

(5)溶菌酶

溶菌酶可与等电点较低的蛋白有强的结合能力。免疫球蛋白等电点约为5,因此,在免疫测定中,溶菌酶可在包被的IgG和标记的IgG间形成桥接,从而导致假阳性。Cu2+离子和卵白蛋白可有效地封闭溶菌酶,防止其联接IgG。

2、外源性:外源性干扰物质包括标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时间过长和标本凝固不全等。

(1)标本溶血

要注意避免出现严重溶血。血红蛋白的血红素基团有类似过氧化物的活性,因此,在以辣根过氧化物酶(HRP)为标记酶的ELISA和CLIA中,如血清标本中血红蛋白浓度较高,则其在温育过程中会吸附于固相,从而与后面加入的HRP底物反应显色或发光,导致假阳性。

(2)标本贮存时间过长

标本在2~8℃下保存时间过长,IgG可聚合成多聚体,在间接法免疫测定中会导致本底过深、甚至造成假阳性。

责任编辑:秦美蓉

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